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    共聚焦顯微鏡
    TCS SP8 DLS共聚焦顯微鏡

    TCS SP8 DLS共聚焦顯微鏡

    發布時間:2020-01-06 瀏覽次數: 將兩種專用成像系統的優勢合二為一:使用 Leica TCS SP8 DLS (數字光片),您可在顯微鏡上使用柔和的單平面照明實現完全的共聚焦。通過研制出 TwinFlect 反光鏡,我們就能將共聚焦平臺 Leica TCS SP8 變為簡單易用的多功能光片顯微鏡。

    徠卡TCS SP8 DLS 結合光片與共聚焦技術 Leica TCS SP8 DLS


    將兩種專用成像系統的優勢合二為一:使用 Leica TCS SP8 DLS (數字光片),您可在顯微鏡上使用柔和的單平面照明實現完全的共聚焦。通過研制出 TwinFlect 反光鏡,我們就能將共聚焦平臺 Leica TCS SP8 變為簡單易用的多功能光片顯微鏡。

    我們轉向采用光片垂直布置設計。

     

    黑腹果蠅眼睛綠色熒光蛋白表征 (3P3 催化劑) 的顏色編碼三維圖集。樣品來源:Nadja Dinges,Roignant Lab,IMB Mainz。

     


    擴展選件


     ● 通過單平面照明增強細胞活性

     ● 使用 sCMOS 攝像頭觀察快速實時過程

     ● 樣品處理簡單,可進行多位置實驗

     ● 將共聚焦模式與光片顯微鏡技術相結合,拓展新應用領域

     ● 兩側同時照明,消除昏暗區域

     ● Leica TCS SP8 全系列始終能針對您的應用找到理想成像方法

     ● 將共聚焦平臺變為光片顯微鏡。隨時從 Leica TCS SP8 升級為 Leica TCS SP8 DLS

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    光片垂直布置—如何將光片技術引入共聚焦平臺?

    光片顯微鏡通常需要在獨立系統中安裝專用的光學裝置,其中照明和檢測物鏡相互垂直布置。Leica TCS SP8 DLS 讓光片顯微鏡變得非常的簡便。獨特的 TwinFlect 反光鏡裝置使照明光片偏轉 90 度,從而將照明和檢測光路集成到每臺倒置 Leica TCS SP8 的縱向軸中,同時又不犧牲共聚焦功能。

     


    執行和記錄長期觀察

    成像需要光照,但光照過強會損傷細胞。光片顯微鏡是當今柔和的成像方案,它可減少光毒性和光漂白造成的總體光損傷。這會自動降低樣品活性。在發育生物學中,柔和光片成像尤其有幫助:其光照強度低,攝取快速,以便長期觀察果蠅胚胎等敏感性發育生物體,并以實時三維方式了解組織和器官的形成過程。


    Low phototoxicity and specimen imaging in 3D: Development of Drosophila melanogaster over six hours. Probe: Light-sensitive RFP. 3D rendering. 150 μm z stack, 30sec/stack.

     


    光片成像原理

    光片顯微鏡對樣品進行單平面照明,非常適合敏感樣品和快速生物過程的成像。由于不存在離焦激發,可將光毒性的影響局限于焦平面上。這表示您還可自動獲得光學切片,并在光片下移動樣品,從而實現樣品 3D 成像。


     



    多色長期觀察


    斑馬魚體側線 17 小時發育過程。樣品來源:Darren Gilmour,EMBL Heidelberg (斑馬魚 36hpf,CldnB:lynGFP/CXCR4B:nucTomato)

    高速成像:斑馬魚跳動的心臟,轉基因株系 flik1::EGFP。在 xytz 錄制之后進行后期攝取對齊。錄制速度:120 幀/秒。來源:Emily Steed,Vermot Lab,IGBMC Strasbourg,France。

     


    以極佳的分辨率快速攝取圖像


    您是否需要以三維方式長期觀察快速周期性生物過程?DLS 模塊就是您的不二選擇。發現斑馬魚心臟的律動之美。 

    使用 Leica TCS SP8 DLS,您可在兩個尖端的 sCMOS 攝像頭之間任意選擇,以出色的分辨率和高達 120 幀/秒的幀頻進行快速圖像攝?。簆co.edge sCMOS 攝像頭和 Hamamatsu 推出的 ORCA-flash 4.0 V2 攝像頭均已完全集成在 LAS X LightSheet Wizard 中。



    追蹤快速的周期性運動

    LAS X軟件里新的 xytz 掃描模式可實現平面時間序列成像,并制成4D電影格式播放。該功能使得研究者可以追蹤那些無法在傳統Z軸堆積延時攝影模式下捕捉到的快速運動-比如斑馬魚心臟的跳動。


     


    眾多其他應用優勢

    我們的光片模塊不僅僅作為共聚焦顯微鏡的功能性插件。Leica TCS SP8 和數字光片相輔相成,使您可隨意擴展選件。您可在 LAS X 軟件中方便地切換共聚焦和光片模式,使用共聚焦技術輕松操控樣品。光轉換或致傷實驗乃至后續的柔和長期觀察將變得十分簡便。

    組合成像模式:在 Kaede 斑馬魚尾巴上的光轉換 (405 nm 激光) 和致傷 (多光子激光) 實驗。移向傷口 (大片紅色區域) 的光轉換細胞 (小紅點) 的延時錄制。


    被巨噬細胞愈合的傷口

    4 日齡斑馬魚胚胎受傷后尾巴中的巨噬細胞 (mpeg1:Kaede)。樣品來源:Francesca Peri,EMBL Heidelberg。

     

    始終選用正確的激光

    Leica TCS SP8 共聚焦顯微鏡的所有可見激光都可用于光片成像。白光激光在光片實驗中提供較大的靈活性,以便選擇正確的染料。在多色實驗中,甚至可使用光譜相近的熒光基團。

     


    熟悉的樣品制備流程

    Leica TCS SP8 DLS 采用垂直實驗配置,樣品制備流程與您原先熟悉的流程相近。樣品封裝在傳統的玻璃底 Petri 培養皿中,可直接操作。您甚至還可在多個實驗位置篩選多個樣品:利用共聚焦載物臺自動化技術在同一實驗配置下實現多樣品成像。唯一的前提條件是:在樣品兩側需要留出放置 TwinFlect 反光鏡的空間。

     

    Leica TCS SP8 DLS 的樣品制備。樣品包裹在玻璃底 Petri 培養皿的瓊脂中。必須將多余的瓊脂清除干凈,以便為 TwinFlect 反光鏡留出空間。

     


    面向工作流的軟件設計

    LAS X 顯微鏡軟件可逐步指導用戶完成數據記錄和評估。面向工作流的設計可幫助用戶高效使用儀器。校準程序十分便捷,可精確創建光片。 

    樣品兩側照明設計:兩塊 TwinFlect 反光鏡相對放置,使它們均可被掃描器瞄準,從而消除昏暗區域。要在較大視場下獲得清晰圖像,可通過 LAS X 軟件的 LightSheet Wizard 在線或離線融合選件將兩幅圖像融合在一起。 

    LAS X 軟件還有許多附加軟件包,您可根據自己的需求進行定制。LAS X 三維可視化模塊可實現直觀剪輯、快速渲染和立體顯示,以新穎的方式交互處理三維數據?!捌促N圖”實驗可幫助您觀察大片區域,而“標記和查找”實驗可在多位置設置下觀察多個相關區域。

     


     

    優質的光學器件

    適合各類應用的優質物鏡是徠卡公司最顯著的標志之一。垂直布置光片系統的核心由物鏡和 TwinFlect 反光鏡裝置構成。您可根據您的實驗要求在兩種照明物鏡間任意選擇 - Leica HC PL Fluotar 2.5x/0.07 和 Leica HCX PL FLUOTAR 5x/0.15,以此創建所需的光片。要展現最微小的細節或獲取更大的視場,您可選擇我們的檢測物鏡:Leica HC FLUOTAR L 25x/0.95 W 或 Leica HC APO L 10x/0.3 W 水浸物鏡。

     


    便捷的數據處理

    長期 3D 觀察過程會產生大量數據。LAS X 軟件中集成了多種工具,可方便地管理這些數據。使用在線融合工具,您可選擇保留原始數據,或僅保留融合圖像以節省磁盤空間。攝取時將自動保存數據,而借助智能加載功能可方便地查看數據,直接訪問大延時數據集中的特定時間點或相關 Z 軸堆棧。您可在管線中編譯所需的后期處理步驟,它們將自動處理。

     



    軟件控制的氣候室

    軟件控制的氣候室可保持最適宜樣品的環境條件。用戶可使用 LAS X 環境控制模塊實現對實驗條件的全面控制。在實驗過程中,可監控所記錄的環境數據。您可在同一個界面設置所有環境條件,并運行溫度曲線,例如,熱沖擊實驗的溫度曲線。



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